交联蛋白质作用分析
在生理条件下，蛋白质与蛋白质的相互作用大多是短暂的，持续时间很短，研究起来较为困难。交联试剂，或交联剂，提供了捕获蛋白质-蛋白质复合物的分析解决方案，其原理是通过共价将蛋白质与蛋白质结合在一起，保留蛋白质之间微弱的相互作用关系，便于后续分离和表征。
交联条件：
交联可以在体内进行，也可以在体外进行。在体内交联时，蛋白质以天然状态交联，而在体外交联时，蛋白质可能发生变性。
体内交联：体内交联时，蛋白质是在细胞内连接的，因此可以解决假阳性相互作用或丢失蛋白质稳定性的问题。疏水性和脂溶性交联试剂常用于与位于细胞膜内的蛋白质进行交联，而亲水性、水溶性交联试剂则用于与细胞膜上的蛋白质发生交联。虽然蛋白质保持天然状态，但由于蛋白质在细胞中的复杂性，体内交联的优化也会变得复杂，并可能仍会发生非特异性交联。使用特殊的交联试剂可以消除非特异性交联问题。
体外交联：在体外交联过程中，细胞被匀浆和裂解。因此，该方法更适合分析更稳定的蛋白质-蛋白质相互作用。由于细胞在特定的裂解缓冲液中裂解，反应条件更容易控制，如温度、pH、离子强度等。由于没有细胞边界，许多类型的交联试剂都适合体外交联，非特异性交联因此也更容易控制。
交联方法：
化学交联：交联试剂通过在两个或两个以上的生物分子的特定氨基酸官能团之间形成化学键，将相互作用的蛋白质、区域或肽共价连接在一起。HIT具有多种商用化学交联剂可供选择，有同基或异基，臂长和臂短，可分裂和不可分裂，可溶于水和-不溶于水等类型。同生物功能交联分子以蛋白质上的同一基团为靶点，而异生物功能交联剂则以不同蛋白质上的不同基团为靶点，以获得更大的变异性或特异性。交联分子也可以设计成包含可分裂的元素，如酯或二硫键，分别通过添加羟胺或还原剂来颠倒或断开连接。交联剂可以是疏水性的，以允许疏水性蛋白结构域的进入或细胞膜的通过，也可以是亲水性的，以限制蛋白质交联到水相区域。
光敏交联：细胞悬浮液或细胞溶解产物中交联剂的使用，可能会导致许多非特异性的交联产生，除了目标蛋白质-蛋白质相互作用，可以创建包含光敏基团在内的更复杂的交联剂，该交联剂只在特定的时间内反应，并只响应紫外线照射。一端有化学交联基团，另一端有光敏基团的异双官能交联剂可通过两步反应选择性地与靶蛋白交联。
蛋白质交联分析的特点：
•研究短暂的体内蛋白质-蛋白质相互作用
•研究低亲和的体外力蛋白质-蛋白质相互作用
•提高检测灵敏度
蛋白质交联分析的流程：
•根据您的具体项目需求，设计交联方法和交联试剂的类型:体内/体外
•参数优化，如键合和淬灭时间
•细胞裂解，CoIP
•Western Blot/质谱分析，视项目需要而定
•数据分析和报告交付
