免疫共沉淀
共免疫沉淀(Co-immunoprecipitation，Co-IP)，是一种应用广泛的识别生理相关蛋白-蛋白相互作用的技术，它利用靶蛋白特异性抗体间接捕获与特定靶蛋白结合的蛋白。Co-IP作为IP的一种扩展，不仅可以捕获和纯化主要靶点，还可以捕获和纯化其他通过原生相互作用与靶点结合的大分子。IP和co-IP的区别是实验的重点：IP主要研究的是与抗体本身相结合的初级靶点；然而，Co-IP针对的是与初级靶点蛋白质相互作用的次级靶点，而不是抗体本身。在免疫沉淀之后，将捕获在珠子上的蛋白质清洗和洗脱，以获得纯化的初级和次级靶蛋白质。这些目标蛋白质可以通过多种方法进行表征，如利用Western Blot，质谱分析等方法以确定伴侣蛋白质的id、结合亲和性、结合动力学和初级蛋白质未发现的功能。
Co-IP的关键步骤：
作为一种强大的技术，Co-IP经常被用来探索蛋白质-蛋白质的相互作用。虽然Co-IP的方法较为直接，但通过Co-IP反应来确定蛋白质-蛋白质的生理相互作用并不容易，因为相互作用的不稳定性、与IP试剂的非特异性结合以及抗体污染等问题都可能对蛋白质-蛋白质相互作用的检测产生负面影响。
蛋白质复合体的Co-IP分析：
由于Co-IP依赖于蛋白-蛋白相互作用来检测结合蛋白，因此在整个Co-IP过程中相互作用间的结合亲和力和稳定性非常重要。结合时间不充分或洗涤步骤过多都可能降低结合效率，并导致无法检测到蛋白质的相互作用。因此，对于低亲和力或动态相互作用的蛋白质，检测蛋白-蛋白相互作用前进行稳定是非常必要的，例如，可以在Co-IP之前进行蛋白质交联。
非特异性相互作用：
细胞膜和细胞器的破裂会导致大量蛋白质的释放，这些蛋白质发生相互接触。因此，不可避免的会出现非特异性交互作用，即假阳性交互作用，干扰数据分析。这种情况在具有非折叠或柔性区域的蛋白质中尤为常见，这些区域粘性较大，并非特异性地与其他蛋白质结合。解决这类问题的方法可以预先清除裂解液，即用一抗去除非特异性蛋白，并改变缓冲液的离子强度以减少非特异性结合。
Co-IP服务的特点:
•研究蛋白质和蛋白质复合物之间的相互作用
•监控蛋白质相互作用的动态
•在非变性条件下研究蛋白质-蛋白质的相互作用
•绘制蛋白质相互作用的结构域
HIT Co-IP服务包括:
•根据您的具体项目需求进行实验设计:缓冲液、珠子、抗体等
•参数优化，如绑定时间
•细胞裂解，IP，洗涤和洗脱
•Western Blot/质谱分析，视项目需要而定
•数据分析和报告交付
