S-亚硝基化分析
S-亚硝基化分析
一氧化氮 (NO) 由一氧化氮合酶 (NOS) 的三种亚型产生，它是一种化学信使，与游离半胱氨酸残基反应形成 S-硝基硫醇 (SNOs)。Snitrosylation 是细胞用来稳定蛋白质、调节基因表达和提供 NO 供体的关键 PTM，SNOs 的生成、定位、激活和分解代谢受到严格调控。
S-亚硝基化是一种可逆反应，SNOs 在细胞质中的半衰期较短，因为宿主的还原性酶，包括谷胱甘肽 (GSH) 和硫氧还蛋白 (thioredoxin)，即脱硝酰基蛋白。因此，SNO 通常储存在膜、囊泡、组织间隙和亲脂性蛋白褶皱中，以保护其不脱氮。例如，介导细胞凋亡的半胱天冬酶，以 SNOs 的形式储存在线粒体膜间隙。作为对胞外或胞内信号的响应，半胱天冬酶释放到胞浆中，高度还原环境迅速使蛋白质脱硝基，导致半胱天冬酶活化并诱导细胞凋亡。
S-亚硝基化不是随机事件，只有特定的半胱氨酸残基是 S-亚硝基化。因为蛋白质可能含有多个半胱氨酸，并且由于 SNOs 的不稳定性，S-亚硝基化半胱氨酸可能难以检测并与非 S-亚硝基化氨基酸区分。
HIT已经建立了一个高灵敏度的HPLC-MS/MS标准操作流程，可以分析真核生物和原核生物中的S-亚硝基化半胱氨酸。此外，我们优化了相关实验方案，使S-亚硝基半胱氨酸的位点定位服务更加快速和灵敏。
HIT的S-亚硝基化分析服务流程:
1.胶内或溶液酶解蛋白质(取决于您寄给我们的样品类型)
2.使用抗S-亚硝基半胱氨酸抗体富集S-亚硝基半胱氨酸
3.HPLC分离，MALDI-TOF MS/MS分析
4.质谱数据解析
