磷酸化分析
磷酸化是细胞信号通路中一种重要的共价翻译后修饰(PTM)。这种由蛋白质激酶催化的修饰具有可逆性。研究表明,30%以上的真核蛋白质会发生磷酸化。磷酸化修饰对靶蛋白的调控机制主要有两种:(1)磷酸化修饰可能引起修饰蛋白如酶和受体结构的构象变化,使其功能“开启”或“关闭”。(2)磷酸化改变了蛋白对效应子的亲和力,磷酸化蛋白可以接受或释放下游因子。磷酸化修饰可调控广泛的生物活性,如细胞生长、细胞代谢、细胞分裂等。
在真核生物中,丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸和组氨酸残基上可能发生磷酸化。在这四种磷酸化中,酪氨酸磷酸化最为罕见,但非常关键。最著名的酪氨酸激酶受体位于MAPK通路的最上游,调节Ras和其他激酶,启动磷酸化级联反应。
HIT已经建立高灵敏度的HPLC-MS/MS 标准操作流程,可以分析真核生物和原核生物的多种磷酸化。此外,我们优化了相关实验方案,可提供快速、灵敏高质量的组氨酸和酪氨酸磷酸化的位点定位服务。
HIT的磷酸化分析服务流程:
1.胶内或溶液酶解蛋白质(取决于您寄给我们的样品类型)
2.磷肽的浓度(可选;取决于磷肽的丰富程度)
3.HPLC分离,MALDI-TOF MS/MS分析
4.质谱数据解析