平行反应监测
PRM是一种基于高分辨、高精度质谱的离子监视技术,能够对目标蛋白质、目标肽段(如发生翻译后修饰的肽段)进行选择性检测,从而实现对目标蛋白质/肽段进行绝对定量。PRM技术基于Q-Orbitrap为代表的高分辨、高精度质谱平台,首先利用四级杆质量分析器的选择能力,用Q1选择目标肽段的母离子,随后在collision cell 中对母离子进行碎裂,最后利用Orbitrap分析器在二级质谱中检测所选择的母离子窗口内的所有碎片信息。这样即可对复杂样本中的目标蛋白质/肽段进行准确地特异性分析。
PRM技术是针对无抗体蛋白的验证新技术,用于label free, iTRAQ, TMT, SILAC等相对定量蛋白质组数据的验证,或对复杂样本中的目标蛋白质进行靶向定量分析。
PRM是以Q-Orbitrap为代表的四极高分辨率质谱平台。与SRM每次执行一次跃迁不同,PRM通过前体离子对每次跃迁执行全扫描,也就是说,并行监控前体离子的所有碎片。首先,PRM采用四极(Q1)选择前驱体离子,选择窗口通常为m/z≤2;然后,前体离子在碰撞细胞中破碎(Q2);最后,Orbitrap取代Q3,以高分辨率和高精度扫描所有产品离子。因此,PRM技术不仅具有SRM/MRM目标的定量分析能力,而且还具有定性能力。(1)质量精度可达到ppm水平,比SRM / MRM更能消除背景干扰和假阳性,有效提高复杂背景下的检出限和灵敏度;(2)产物离子全扫描,无需选择离子对和优化破碎能,更容易建立分析;(3)线性范围更宽:增加到5-6个数量级。
PRM应用:
1.iTRAQ差异蛋白的验证;
2.验证无标记差异蛋白;
3.蛋白质和肽绝对定量;
4.量化疾病标记物,建立诊断模型;
5.磷酸化蛋白定量、甲基化蛋白定量;
6.其他翻译后修饰蛋白定量;
7.路径的定量分析。