绝对定量（AQUA）
绝对定量（AQUA）
绝对定量（AQUA）是一种靶向定量蛋白质组学技术，显示出强大的高效性，并被越来越多地应用于各种定量蛋白质组学研究。AQUA策略是对蛋白质及其修饰状态的进行绝对定量。合成的肽与稳定的同位素合并作为理想的内部标准，模拟天然肽形成的蛋白质水解。这些合成肽也可以通过共价修饰得到，（如磷酸化、甲基化、乙酰化等)，在化学上与自然发生的翻译后修饰相同。AQUA内标肽可以通过串联质谱仪的反应监测分析，精确定量地测量蛋白质和蛋白质水解后的翻译后修饰蛋白的绝对定量水平。
绝对定量方法是基于发现质谱信号响应与蛋白质浓度之间的一个出人意料的关系:每摩尔蛋白质中三个最强胰蛋白酶的平均质谱信号响应是恒定的，变异系数小于10%。给定一个内部标准，该关系用于计算通用信号响应因子。通用信号响应因子(计数/mol)被证明对所有被测蛋白质是相同的。同位素法只能建立表达蛋白的相对定量，而绝对定量(AQUA)策略可以为精确测定蛋白表达和翻译后修饰水平提供信息。AQUA方法依赖于使用合成的内部标准肽，在消化过程中以已知浓度引入到细胞裂解物中。通过串联质谱仪的反应监测(SRM)实验对蛋白水解样品进行分析，可以直接检测和定量天然肽和同位素标记的AQUA内标肽。该方法简单、灵敏，再加上串联质谱仪的广泛使用，使AQUA策略成为直接从细胞裂解物中测量蛋白质水平和翻译后修饰的一种非常有用的方法。
