肽段或蛋白质的序列分析
HIT提供治疗性蛋白、单克隆抗体和蛋白疫苗的n端序列分析,包括Edman和质谱分析。蛋白质的N端氨基酸序列是生物药的关键质量属性之一。Edman降解法N端测序是分析这一属性的常规方法。通过Edman降解法分析N端的15个氨基酸序列在生物药申报时通常是必检项目;同时也是很多已上市生物药的年检项目(见2015年版药典)。在科研中,对未知或者不确定理论序列的蛋白可以使用N端测序为确证提供关键信息。所以该方法在科研和工业中都有广泛的应用。
N-氨基端 Edman 降解:
第一步,通过PITC(苯异硫氰酸酯)这种有机试剂和蛋白或多肽N末端的α-氨基反应,使得N端的第一个氨基酸从序列上断裂得到游离的PITC衍生氨基酸,同时暴露出序列中第二个氨基酸残基的α-氨基。
第二步,测序:断裂下来的PITC衍生氨基酸通过HPLC分离后根据保留时间来判断氨基酸的种类。这样即完成一个循环,分析出了N端的第一个氨基酸。
假设反应是完全有效的,这种方法可以从N端对整个氨基酸进行排序。N端Edman测序虽然与质谱仪相比效率较低,但在蛋白质分析方面仍具有其他分析方法不易获得的优势。以目前的技术,从蛋白质和肽的N端获得至少20到25个序列残基是相当常规的。
目前,质谱是最常用的蛋白质序列分析技术。质谱(ESI、MALDI)分析技术作为一种精确测定蛋白质质量和表征蛋白质的高效方法。蛋白质经过酶解处理成肽段,然后用质谱仪(ESI、MALDI-MS/MS)进行分析。然后通过分析每个肽段质谱图得到肽序列,这些肽段序列共同构成了完整的蛋白质序列。
蛋白测序服务:
•蛋白质N-端或C-端信号序列分析
•蛋白N-或C-端标记
•N-或C-末端的翻译后修饰
技术平台:
1. 液相色谱(LC)2. 高效液相色谱(HPLC)3. 基质辅助激光解吸电离质谱(MALDI-MS)4. PPSQ-33A型蛋白测序仪(SHIMADZU)