等电点分析
等电点(pI)被定义为蛋白质净电荷为零的pH值。等电点分析可用于研究异质性,分析蛋白质折叠状态,预测蛋白质-蛋白质相互作用。
蛋白质是两性分子,含有酸性和碱性氨基酸。构成蛋白质的氨基酸可能是正的、负的或中性的,这取决于环境的pH值,因此赋予蛋白质整体电荷。等电点是特定分子不带净电荷的pH值。因为特定的突变、截断或翻译后修饰可以改变天然蛋白质的pI。分子上的净电荷受到自身的pI和周围环境的pH值的影响,蛋白质会分别由于质子(H+)的增加或减少而带上更多的正电荷或负电荷。当pH值低于pI时,蛋白质带净正电荷;在pI以上它们带一个负电荷;等于它们的pI,蛋白质没有净电荷,因此在电场中不会进一步移动。
通过等电聚焦(IEF)可以检测蛋白质的等电点。当蛋白质向电荷相反的极移动时,当它们接近特定的pI时,就会在pH梯度中被固定。因此,蛋白聚焦成尖锐的固定带,每个蛋白定位于与pI相对应的pH梯度中的一点。在IEF中,只有一个电荷不同的蛋白质可以被分割成不同的条带,这使得这项技术具有极高的分辨率。
毛细管等电聚焦(cIEF)技术
毛细管等电聚焦允许基于等电点(pI)分离蛋白质/肽混合物、蛋白糖苷和其他带电变体。在阳极液和阳极液槽上施加电压,通过毛细管建立一个pH梯度。在电场中应用的蛋白质可以根据它们的净电荷被分离,当它们达到pH值(等于它们的pI)时被固定。
与传统的凝胶等电聚焦(IEF)相比,cIEF具有更高的分辨率,更快的样品分析速度,检测极限降低10倍。此外,在传统的等电聚焦中,cIEF允许实时观察和消除样品在长时间动员阶段的降解。
采用毛细管等电聚焦技术(cIEF)作为毛细管电泳技术的更新版本用于pI的测定,具有较高的分辨率和准确性、重复性和高通量;离子交换色谱法可以根据蛋白质分子的净电荷分离蛋白质分子,用于监测蛋白质疗法的电荷变化,以评估不同种类蛋白质之间的可比性。
毛细管等电聚焦(cIEF)是一种高分辨率的分析技术。我们的毛细管电泳服务可以让你快速准确地确定蛋白质的等电点。
pl测定的应用
研究蛋白质异质性,包括异构体、PTMs和蛋白质截断
分析蛋白质折叠状态
预测蛋白质-蛋白质相互作用
我们的分析服务提供:
确定蛋白质的等电点
提供比传统毛细管电泳更高的分辨率
更快速和准确的结果。我们的毛细管电泳消除了长动员阶段,这也导致了蛋白质降解的过程