二硫键定位分析
二硫键定位分析
二硫键是重要的蛋白质翻译后修饰形式，也是一种比较特殊的修饰。蛋白质通过各种链间和链内的半胱氨酸连接在一起，对蛋白质分子保持正确的高级结构，维持必要的生物活性至关重要。因此在蛋白质类药物的生物化学分析中，二硫键一直是关心的重点。
利用质谱分析二硫键，以前由于二硫键多肽分子的二级质谱图非常复杂，质谱分析需要大量人工进行，费时费力且不能准确有效。而现代生物质谱学在最近十年发展非常迅速，大为提高了对蛋白质分子的定性定量和翻译后修饰的分析能力。
华怡创生结合蛋白质溶液内的非还原酶解和LC-MS/MS，对供试品的二硫键配对方式进行分析，明确供试品的各种链内和链间二硫键配对方式，并提供确定这些二硫键配对方式的实验证据，包括一级和二级质谱数据等。
“蛋白质类药物的二硫键配对组成是非常重要的理化性质”
技术指标
本方法所检测的样品是蛋白质或多肽类供试品，测量的是二硫键所在多肽分子的分子量，测定的是该多肽分子的氨基酸序列和二硫键配对方式。蛋白质或者多肽供试品既可以是固体样品，也可以是溶液样品，供试品量不应少于200μg。供试品如果为固体，应为蛋白质多肽冻干制品；如果为液体，样品中蛋白质多肽浓度应尽可能在2mg/ml以上。
本方法检测是二硫键配对方式和其所在多肽分子的氨基酸序列。二硫键所在多肽分子的分子量与理论值相差小于2 Da，其二级碎片分子量与理论值相差小于0.8 Da。对还原前后的二硫键所在多肽分子做色谱质谱图分析（XICs），其信号峰面积需有显著差异。
二硫键测定方法所使用的仪器是，Thermo公司生产的高校液相（U3000)BRUKER串联质谱仪(Q-TOF)和 Chameleon色谱系统。
