2D电泳分析
二维凝胶电泳,简称2-DE,是一种常用的用两种性质在二维分别分析蛋白质混合物的凝胶电泳。在二维凝胶电泳中,蛋白质首先通过等电聚焦pI进行分离,然后通过SDS-PAGE进行分子量分离,从而使样品蛋白分布在二维凝胶剖面上。该技术扩大了可识别蛋白质的数量,并为蛋白质组分析提供了更有效的数据和更详细的信息。
二维电泳以一维电泳开始,然后用第二种性质将分子从第一个方向90度分离。在一维电泳中,一维分离的蛋白质会沿着一条线排列,然后分子在二维凝胶中分散开来。一般情况下,两种不同性质的分子不太可能有相似之处,因此分子在二维电泳比一维电泳更有效地分离。
HIT提供的2-DE服务
2-DE:在第2维按质量分离蛋白质之前,先用十二烷基硫酸钠(SDS)和还原试剂对其进行处理,使其展开成长而直的分子,并与许多SDS分子结合。由于SDS分子是带负电荷的,所以所有的蛋白质之间的质量-电荷比都大致相同。在第二维中,电势与第一场成90度角。因此,当通电时,凝胶就像一个分子筛,根据蛋白质的分子量将其分离。较大的蛋白质在凝胶中的位置较高,较小的蛋白质能够通过筛选到达凝胶的较低区域。
蛋白检测:经过2-DE分析,得到了一种基于分子质量和pI分布的蛋白质凝胶。这些蛋白质可以用多种方法检测,但最常用的染色是银染色和考马斯亮蓝染色。在前一种情况下,银胶体被应用到凝胶上。银与蛋白质中的半胱氨酸结合,在紫外线照射下变暗。银的含量与颜色的深浅有关,因此也与凝胶上特定位置的蛋白质含量有关。这种测量只能给出近似的量,但对于大多数目的来说已经足够了。其他染色方法,如考马斯亮蓝结合凝胶内消化等也适合随后的MS检测。
HIT的优势
已将2D SDS PAGE 方法写成标准操作流程(SOP)并不断优化
可以通过各种方法检测蛋白质,包括最常用的染色法(如银染色法和考马斯亮蓝染色法),以满足不同的要求
蛋白质斑点的检测和定量有多种计算机方法,如SameSpots、Delta2D、ImageMaster等